尖吻蝮蛇AaHⅣ催化结构域和非催化结构域免疫保护性比较

目的表达尖吻蝮蛇出血性P-Ⅲb型金属蛋白酶AaHⅣ催化结构域和非催化结构域，并鉴定其免疫小鼠后抗体的中和保护性。方法采用基因合成的方法合成尖吻蝮蛇P-Ⅲ6型金属蛋白酶AaHⅣ的催化结构域和非催化结构域cDNA，分别重组在质粒pET28a（+）上，转入BL21（DE3）中表达，产物经亲和层析纯化。昆明小鼠随机分为催化结构域蛋白免疫组、非催化结构域蛋白免疫组、AaHⅣ免疫组、PBS免疫组，每组6只[4周龄，体质量（20±2）g，雌雄各半]，3次免疫后分离血清，与AaHⅣ体外孵育后行出血中和实验。结果ELISA显示重组表达的AaHⅣ催化结构域和非催化结构域均具有免疫原性。出血中和实验显示：催化结构域免疫组和非催化结构域免疫组均较PBS免疫组显著减少出血面积（P<0.05）；AaHⅣ免疫组与催化结构域免疫组之间无统计学差异（P>0.05），而与非催化结构域免疫组之间存在统计学差异（P<0.05）。结论AaHⅣ催化结构域免疫小鼠产生的抗体在中和AaHⅣ出血毒性方面效果更为显著。