姜黄素对神经干细胞Wnt/β-catenin信号通路表达影响的离体研究

目的探讨姜黄素对神经干细胞内Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法选择孕14.5d的SD大鼠，取胚鼠大脑前端2/3部分组织，提取神经干细胞。培养并传代3次时，进行细胞免疫荧光学鉴定；同时换用只添加2%B27的Neurobasal培养基连续培养细胞，并设置空白对照组、IWR-1（Wnt信号通路特异性阻断剂10μmol/L）处理组、姜黄素500nmol/L组、IWR-1+姜黄素500nmol/L组（先添加IWR-1，20min后再加入姜黄素）、DMSO组。细胞培养3d时，采用Westernblot方法检测各组wnt3a、β-catenin蛋白表达水平变化，采用RT-PCR方法检测各组wnt3a、β-catenin的mRNA表达量变化。结果Westernblot结果显示：对培养第3代的细胞干预3d后，姜黄素组wnt3a、β-catenin表达量较其他各组明显升高（P<0.05），IWR-1处理后其表达水平明显降低（P<0.05）；姜黄素联合IWR-1处理细胞后wnt3a、β-catenin表达量明显减少（P<0.05）；DMSO组表达量接近空白对照组。RT-PCR结果显示：与空白对照组比较，姜黄素组wnt3a及β-catenin基因表达水平明显上调（P<0.05），而IWR-1组wnt3a及β-catenin基因表达水平明显下降（P<0.05），总体变化趋势与Westernblot结果一致。结论初步证明姜黄素可激活Wnt信号通路，由此推测姜黄素与经典的Wnt/β-catenin信号通路密切相关。