Frizzled4在小鼠毛囊周期中的表达

目的探讨Wnt蛋白的受体分子Frizzled4在小鼠毛囊周期中的表达、功能及其意义。方法利用实时定量PCR、RT-PCR、Westernblot和免疫荧光等技术分别检测Frizzled4mRNA和蛋白在毛囊生长期（P1d、P3d、P8d）、退化期（P16d）和静止期（P21d）中的表达。免疫荧光技术检测Frizzled4在小鼠皮肤上皮细胞JB6cl30-7b中的定位，MTT检测用抗Frizzled4抗体处理JB6cl30-7b细胞后的增殖情况。结果在毛囊生长期早期，Frizzled4mRNA和蛋白在P1d的小鼠背部皮肤中表达明显，膜表达于Bulge、毛囊外根鞘及毛球外侧。在P3d，Frizzled4蛋白表达明显上调，主要表达于Bulge、毛囊外根鞘、内根鞘、precortex、部分毛球外侧。在生长中期（P8d），Frizzled4蛋白的表达最强，集中在毛囊Bulge、外根鞘上段及内根鞘。当毛囊进入退化期（P16d），Frizzled4mRNA和蛋白的表达显著降低（P<0.05），此时主要定位于Bugle。而在静止期，Frizzled4mRNA和蛋白表达最低（P<0.05），只有少量Frizzled4阳性细胞出现在毛囊Bulge。免疫荧光技术检测Frizzled4蛋白同样也在JB6cl30-7b细胞膜中表达。MTT结果显示与对照组相比，10μg/mL的抗Frizzled4抗体处理JB6cl30-7b细胞后光密度值明显降低（P<0.05），而20μg/mL的抗Frizzled4抗体处理后的光密度值降到最低（P<0.05）。结论Frizzled4在毛囊周期中的表达具有时空特异性。伴随着毛囊的生长，Frizzled4的mRNA和蛋白水平都呈现高表达，随着毛囊的退化而表达降低，直至静止期维持低表达水平。拮抗Frizzled4蛋白的作用促使细胞增殖受到明显抑制，提示Frizzled4的表达与毛囊细胞的增殖和分化相关。