金黄色葡萄球菌agr基因敲除及其对膜泡毒力影响

目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌RN4220附属基因调节系统（agr）的敲除株，探讨agr基因缺失对金黄色葡萄球菌分泌膜泡毒力的影响。方法分别扩增agr基因的上下游同源臂，利用重叠PCR获得agr基因上下游同源臂的融合片段，经酶切后连接敲除载体PYT3，构建同源重组质粒pYT3::Δagr，电转化至金黄色葡萄球菌RN4220，利用pYT3质粒对温度敏感的特点筛选agr缺失的突变株。分别制备野生菌RN4220和突变株RN4220::Δagr的膜泡，小鼠毒力实验观察agr基因缺失后对金黄色葡萄球菌膜泡毒力的影响。结果同源重组质粒pYT3::Δagr通过酶切鉴定证明构建成功；经PCR及DNA测序证实获得金黄色葡萄球菌RN4220agr缺失突变株，重组效率为5.6%；agr突变株与野生株相比，其分泌膜泡的毒力大大降低，72h内小鼠存活率为100%。结论agr基因缺失后能够显著降低膜泡的毒力。