基因捕获筛选TGF-β1诱导间充质干细胞C3H/10T1/2平滑肌分化的差异表达基因

目的利用基因捕获方法，分离转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)诱导小鼠胚胎间充质干细胞C3H/10T1/2(简称10T1/2细胞)平滑肌分化前后差异表达基因。方法5ng/mLTGF-β1诱导10T1/2细胞平滑肌分化，倒置显微镜下观察细胞形态学改变，RT-PCR鉴定平滑肌分化相关基因alpha平滑肌肌动蛋白(alphasmoothmuscleactin,αSMA)、平滑肌22alpha(smoothmuscle22alpha,SM22α)、平滑肌肌球蛋白重链(smoothmusclemyosinheavychain,SM-MHC)和血清应答因子(serumresponsefactor,SRF)，免疫细胞化学实验检测αSMA。TGF-β1诱导建立的10T1/2细胞基因捕获阳性克隆库分化前后进行LacZ染色。cDNA末端快速扩增法(rapidamplificationofcDNAends,RACE)及电子克隆分离差异表达序列，在GenBank网站nBLAST进行生物信息学分析，用GenBank网站在线软件BankIt提交GenBank获取ID号，用pI/Mw软件计算蛋白分子量、等电点。Real-timePCR检测新基因mgt-16在BALB/c小鼠小肠、骨骼肌及心肌的表达。结果细胞形态学、RT-PCR及免疫细胞化学实验鉴定TGF-β1成功诱导10T1/2细胞平滑肌分化。LacZ染色筛选获得2个平滑肌分化后差异表达克隆。RACE、电子克隆和nBLAST分析后发现为线粒体核糖体蛋白S6(mitochondrialribosomalproteinS6，Mrps6)和新基因mgt-16。mgt-16基因位于19号染色体，编码一个93个氨基酸的蛋白(命名为mgt-16)，相对分子质量为9772.02，等电点为6.04，提交后ID号为GU266552。新基因mgt-16在BALB/c小鼠小肠表达较高，而在骨骼肌、心肌表达较低。结论利用基因捕获分离获得了TGF-β1诱导平滑肌分化前后2个差异表达基因：Mrps6和新基因mgt-16。