A20突变体对前列腺癌细胞炎症反应因子及凋亡抑制基因表达的影响

目的通过构建A20突变体真核载体，获取A20突变体，研究其对前列腺癌细胞PC-3M细胞炎症反应因子及凋亡抑制基因表达的影响。方法构建A20突变体pEGFP-C1表达载体，提取质粒，限制性内切酶酶切鉴定并测序。质粒DNA转染COS7细胞，用LPS诱导PC-3M细胞产生炎症反应，利用Westernblot法检测PC-3M细胞A20，IκB-α、pERK1/ERK2、pJNK、Bcl-2;利用ELISA检测NF-κB、TNF-α、IL-6等的水平。结果限制性内切酶酶切鉴定与DNA测序证实合成A20突变体真核载体寡核苷酸链插入正确。Westernblot检测结果表明转染后PC-3M细胞A20蛋白表达显著增。A20突变体抑制IκB-α的降解,ERK1/ERK2、JNK磷酸化及凋亡抑制基因Bcl-2的表达。ELISA法检测结果表明，A20突变体能显著抑制NF-κB、TNF-α、IL-6的表达(P<0.05，P<0.01)。结论成功构建人A20突变体真核表达载体，A20突变能抑制炎症反应因子及凋亡抑制基因。