鲑点石斑鱼皮肤抗菌活性蛋白的纯化及抗菌活性(英文）

近年来在多种生物体中都发现有抗菌活性蛋白和多肽。由于其具有生物化学多样性，抗病毒、微生物、真菌、原生动物、肿瘤，促进伤口愈合等生物学活性，而引起研究者的极大兴趣。抗菌活性蛋白和多肽在动物的先天免疫中具有重要作用，它们直接作用于细菌，并将其杀死。鲑点石斑鱼(Epinephelusfario)是中国南方水产养殖中重要的海水鱼。近年来，由于细菌和病毒引发的病害造成鲑点石斑鱼大量死亡，但其抗菌活性蛋白及多肽目前还未见报道。本研究发现鲑点石斑鱼皮肤具有抗菌活性成分，鲑点石斑鱼皮肤匀浆物经胰蛋白酶水解后抗菌活性丧失，说明该活性是由蛋白质引起的。经离子交换层析及凝胶过滤层析，从鲑点石斑鱼皮肤中分离纯化到抗菌活性蛋白（Efap）。SDS-PAGE显示，Efap为单链蛋白，分子量约41kD。该成分能同时抑制革兰氏阳性菌，如金黄色葡萄球菌、滕黄微球菌、枯草牙胞杆菌和革兰氏阴性菌，如溶藻弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌、多杀性巴氏杆菌、嗜水气单胞菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌。革兰氏阴性菌中，溶藻弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌和多杀性巴氏杆菌对Efap较敏感，MIC<20mol/L，其他3种菌敏感性较差，MIC>20mol/L。另外，Efap显示出较强的抗金黄色葡萄球菌的活性，MIC为5—10mol/L。Efap的广谱抗菌性，说明其在鲑点石斑鱼免疫防御中具有一定的作用。