体外分步诱导猕猴胚胎干细胞为肝细胞

采用分阶段诱导方法模拟肝细胞体内发育，建立体外诱导猕猴胚胎干细胞（rhesusmonkeyembryonicstemcells,rESCs）分化为成熟肝细胞的体系，对研究以ES细胞为基础的临床替代治疗人类晚期肝脏疾病具有重要的意义。将rESCs团块在含有10%FBS的DMEM培养基中悬浮培养11d，形成含有早期内胚层细胞的拟胚体（embryonicbodies,EB）并开始表达早期肝细胞的部分基因或蛋白，将11日龄EB接种至包被有ECM的组织培养皿，分阶段加入aFGF、BMP-4及OSM。经aFGF和BMP-4诱导7～10d后，分化细胞形态变为具有双核的多角形细胞，表达早期和中期肝细胞特异性的蛋白（AFP、ALB及CK18）和基因（AFP、ALB、APOH，G-6-P及TAT），并具有储存糖原的功能。撤除aFGF和BMP-4，添加OSM继续诱导7～10d，分化的细胞表达成熟肝细胞所特有基因CYP1B1和ADH1C，并具有摄取靛青绿的能力。