一种从鱼类卵巢制备地高辛标记mtDNA探针的简易方法

线粒体DNA限制性片段长度多态性（RFLP)分析，已被广泛地应用于动物的系统进化和遗传多样性研究，取得了许多有意义的结果。线粒体DNARFLP分析一般有两条途径：一是从动物组织中提取mtDNA后，酶切，紫外灯下观察，或放射性自显影。这要求所提取的mtDNA量足够多，或纯度相当高；二是将基因组DNA酶切后，用mtDNA探针进行Southern杂交。该途径不需要专门提纯mtDNA，特别适合于微量mtDNA的RFLP分析。进行Southern杂交分析，关键在于要有高质量的探针。用于制备探针的mtDNA，纯度要求较高，一般采用氯化铯密度梯度离心或制备mtDNA克隆等方法获得。这些方法，不仅操作步骤繁锁，而且设备条件要求高，在一般实验室难以实施。我们在进行鱼类mtDNARFLP分析时，发现鱼类内脏和肌肉组织mtDNA含量较低，特别对于一些小型鱼类，能获得的mtDNA很少，无法进行足够的酶切分析，但是，从鱼类卵巢可分离制备较多的mtDNA，经进一步电泳纯化后，可制成纯度较高的地高辛标记mtDNA探针。我们建立了一种利用鲤鱼卵巢组织制备鱼类mtDNA地高辛标记探针的方法。该方法具有简便、经济、灵敏度高的特点。