飞蝗总DNA的抽提及其RAPD分析条件的摸索

通过试验寻求得到一种快速、简便抽提飞蝗(Locustasp.)总DNA的方法，使每头雄性和雌性成虫分别可以得到50和100μg的总DNA。所得到的总DNAOD[260]/OD[280]为1.5—2.2，分子量45kb。为了获得高分子量的DNA产品，使RPAD结果具重复性，酚氯仿抽提后的DNA沉淀用灭菌Tip头挑出，而不用离心收集。对各种分析条件如模板、Taq酶、dNTP及引物的浓度、不同的PCR仪、反应管进行了比较试验，发现在一定的范围内，它们对RAPD结果影响不大。用优化的试验条件对我国3个飞蝗亚种5个地理种群进行RAPD分析，结果在3个亚种UPGMA聚类图中，东亚飞蝗和西藏飞蝗的2个种群以100%Bootstrap分别聚类在一起，亚洲飞蝗与东亚飞蝗的2个种群以66%的Bootstrap聚类在一起。在3个亚种所有个体的UPGMA聚类图中，亚种内的所有个体都聚类在一起，各自形成独立分支，说明3个飞蝗亚种有明显的区别。西藏飞蝗的2个种群之间，群居型与散居型东亚飞蝗之间在聚类图中混合聚类，说明它们之间存在基因交流。