内蒙古绒山羊毛囊兴盛期皮肤cDNA文库的构建及KAP6-2cDNA的克隆

用SMART技术构建了绒山羊(Caprahircus)毛囊兴盛期皮肤组织的cDNA质粒文库。TrizolReagent(GIBCO/BRL)分离RNA后，用Oligotex(QIAGEN)提取mRNA；以锚定引物反转录合成cDNA第一链作为模板，以2个锚定引物，用长链PCR扩增全长cDNA双链。CHROMASPIN-400去除小片段后用SfiⅠ酶切，连接到SfiⅠ消化的pBluescriptⅡSK(带有SfiⅠA和B两个位点)质粒载体中，转化E．Coli5α，库容量为1.8×10[5]clones。随机挑选克隆提取质粒，5′测定插入片段的核苷酸序列，与GenBank数据库比对后发现1个KAP6-2cDNA，序列号为AY316158。绒山羊KAP6-2由675个核苷酸组成，编码96个氨基酸，具有高甘氨酸/酪氨酸HGTps与富含半胱胺酸蛋白之间的中间特征。