家蝇触角cDNA文库的构建及质量分析

采用SMART(switchingmechanismat5′endofRNAtranscript)技术，构建了家蝇(Muscadomestica)的cDNA质粒文库。按TRIzolReagent试剂盒的操作说明提取家蝇触角总RNA，以此为模板，通过PowerScript[TM]反转录酶反转录合成第一链cDNA；再以第一链cDNA产物为模板，用LD-PCR合成cDNA双链。该cDNA产物经分级分离、连接和电转化，即得到家蝇触角cDNA原始文库，其滴度为6.3×10[8]cfu/mL。对原始文库进行扩增，取适量扩增文库稀释并涂平板，用PCR方法测得文库的重组率为91%，插入cDNA的平均长度为1.7kb。随机挑取克隆提取质粒，5′端测定插入片段的核苷酸序列，克隆得到一个具有5′和3′非编码区的气味结合蛋白OBP3基因(MdomOBP3，GenBank登录号AY826189)。测序分析表明，该基因具有气味结合蛋白的标志性结构域；由推导的氨基酸序列同源性分析表明，该基因与已报道的双翅目昆虫气味结合蛋白OBP有较高的同源性。