脊尾白虾组织蛋白酶L基因的克隆及其表达分析

根据本实验室构建的脊尾白虾(Exopalaemoncarinicauda)血细胞全长cDNA文库获得的EST序列,利用RACE技术克隆获得脊尾白虾组织蛋白酶L基因的cDNA全长,命名为EcCatL基因。该序列全长1136bp,包括5'非编码区24bp,开放阅读框960bp和3'非编码区152bp,开放阅读框共编码319个氨基酸,预测相对分子量为35.30×103,理论等电点为5.27。同源性分析表明,脊尾白虾组织蛋白酶LEcCatL氨基酸序列与其它甲壳动物高度保守,与变色小长臂虾(Palaemonetesvarians)及北极甜虾(Pandalusborealis)CatL的同源性分别为92%和76%。系统进化分析表明,EcCatL基因氨基酸序列与变色小长臂虾的CatL聚为一支。荧光定量PCR分析结果表明,EcCatL基因在血细胞、鳃、肝胰腺、肌肉、卵巢、肠、胃及眼柄中均有表达,其中肝胰腺中的相对表达量最高。感染鳗弧菌及WSSV后6h和12h,脊尾白虾血细胞和肝胰腺中EcCatL的表达量较对照组均极显著增加(P<0.01),且具有明显的时间差异性,表明EcCatL基因在脊尾白虾免疫反应中具有重要作用。