大豆胞囊线虫热激蛋白基因Hsp70的克隆与原核表达

采用RT-PCR技术结合基因组步移技术，从大豆胞囊线虫（Heteroderaglycines）中克隆了热激蛋白70基因（Hsp70）的全长cDNA序列（Hg-Hsp-70），全长1953bp，GenBank登录号为FJ816100.1。碱基序列分析结果表明，该序列含有9个外显子与8个内含子，与其它线虫具有较高的同源性。氨基酸序列分析表明，该基因编码650个氨基酸，相对分子量为70.7kD，具有2个Hsp70基因家族的签名序列，与其它线虫的该基因氨基酸序列具有很高的同源性。构建了原核表达载体Hsp70pEASY-E1，采用IPTG诱导蛋白表达，SDS-PAGE电泳结果表明，当IPTG终浓度为0.2~1.2mmol？L-1时均能显著诱导表达；以终浓度0.8mmol？L-1的IPTG诱导5h蛋白表达量达到最大值。