野生大豆ISSR体系的优化及其在远缘杂交后代鉴定中的利用

????以内蒙古野生大豆为材料，运用5因素5水平正交试验设计对ISSR？PCR反应体系中DNA模板、Taq酶、引物、dNTPs和Mg2+用量进行优化试验，之后利用优化后的ISSR-PCR体系对内蒙古野生大豆及其与栽培大豆的杂交后代进行遗传关系研究。正交试验结果表明，各因素对野生大豆ISSR-PCR反应影响大小依次为Taq酶＞Mg2+＞引物＞模板DNA=dNTPs，最佳反应体系为模板DNA50ng、Taq酶0.5U、引物（10μmol？L-1）1.0μL、Mg2+（25mmol？L-1）？2.0μL？及dNTPs（25mmol？L-1each）3.0μL，2μL10×PCRbuffer、ddH2O补足至20μL。以10个引物对供试材料进行扩增，共得到条带109个，多态性百分率为60.23%，其中引物S23可以将所有供试材料进行区分。基于ISSR标记的聚类分析将13个供试材料划分为3类，S001、S002、2、5、8-1和8-4为第一类，29、SF、NY、ZS、0004和PZ为第二类，Y为第三类。