大豆幼荚全长cDNA文库的构建及鉴定分析

??????构建大豆幼荚全长cDNA文库，可为克隆与大豆产量相关基因，培育高产大豆新品种奠定基础。以吉农18大豆幼荚突变体为材料，提取大豆幼荚总RNA，反转录成单链cDNA，LD？PCR方法合成双链cDNA；PCR产物经蛋白酶K消化、Sfil酶切后，采用CHROMSPIN？400柱分级分离，回收500bp以上的cDNA组分。以λTriplE×2载体连接并进行体外包装，构建吉农18大豆幼荚全长cDNA文库。经检测研究构建的大豆幼荚cDNA原始文库滴度达到1.5×106pfu？mL-1，重组率达92％。扩增的文库滴定达到2.6×108pfu？mL-1，重组cDNA片段长度在500bp以上。结果显示构建的大豆幼荚全长cDNA文库符合高质量文库的标准，可用于进一步开展相关基因的克隆及分子生物学研究。