副溶血弧菌不耐热溶血毒素的表达与纯化

？目的表达和纯化融合表达的副溶血弧菌不耐热溶血毒素.方法将表达载体pET32a+-tlh转化大肠杆菌BL21(λDE3),诱导表达副溶血弧菌不耐热溶血毒素,表达产物用聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,8mmol/L的尿素溶解包涵体,用6×his组氨酸蛋白质镍亲和层析树脂亲和层析纯化目的蛋白.结果诱导表达的目的蛋白以包涵体形式存在,其含量约占菌体总蛋白的10%,纯化获得了高纯度的融合表达的副溶血弧菌不耐热溶血毒素.结论转化有重组质粒pET32a+-tlh的BL21(λDE3)可稳定高效地表达目的蛋白,采用低浓度的咪唑、β-巯基乙醇和Tritonx-100等方法减少杂蛋白污染,亲和层析纯化目的蛋白,可获得高纯度的目的蛋白.