转基因轮状病毒疫苗植物表达载体的构建及GUS基因表达

？目的选用植物细胞表达轮状病毒结构蛋白,拟构建有效植物细胞表达系统.方法利用PT-PCR扩增A组轮状病毒外壳蛋白VP4基因片段,经双酶切后与植物表达载体连接,转化感受态细菌TG1.利用地高辛标记探针进行斑点杂交检测,筛选出阳性克隆,拟用该克隆转化马铃薯细胞,研制新型轮状病毒疫苗.本研究还利用β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因转化马铃薯细胞.结果A组轮状病毒SA11株VP4基因产物大小与设计相同,为960bp.在被检测的未知载体中,有四个显紫色斑,可判定其为带有VP4cDNA的转化载体.用肉眼或显微镜可观察到马铃薯组织细胞中的蓝色物质.结论在转基因植物组织器官中观察到GUS的活性,获得外源基因转化的条件.拟用本研究构建的表达载体转化马铃薯细胞,研制新型轮状病毒疫苗.