|
|
中国公共卫生 2001
SAPK/JNK活性的非放射性测定方法与初步应用DOI: 10.11847/zgggws2001-17-02-07, PP. 107-108 Keywords: 应激活化蛋白激酶(SAKP/JNK),非放射性,化学发光法 Abstract: ？目的建立SAPK/JNK活性的非放射性测定方法.方法采用“免疫沉淀法”提取SAPK,根据SAPK可以使底物cJun(Ser63和Ser73)磷酸化的原理,以N末端融合有cJun的谷胱甘肽Seharosebeads从细胞裂解液中“亲合分离”SAPK;然后进行体外磷酸化;以cJun的磷酸化特异性抗体进行蛋白质免疫印迹杂交;最后以“化学发光法”测定磷酸化底物cJun来反映细胞内SAPK的活性.结果以25～100μmol/LCdCl2处理豚鼠肾上腺皮质细胞2小时,细胞内SAPK活性随染毒剂量增加而轻度增加.结论该法测定细胞内SAPK活性,方法灵敏、特异性强、效果良好.
|
