辐射诱导Smac表达腺病毒穿梭载体构建及鉴定

？目的构建辐射敏感启动子Egr-1诱导人线粒体促凋亡基因(Smac)表达的腺病毒穿梭载体pshuttle-Egr1-hSmac。方法利用RT-PCR方法从5月龄流产的胎儿肝脏组织中扩增出人SmacDNA编码序列(CDs),从pMD19T-Egr1质粒上将Egr-1基因切下,利用基因重组技术构建含有辐射诱导启动子Egr1的腺病毒穿梭载体pshuttle-Egr1-hSmac。结果经测序证实,获得的人Smac基因与GenBank公布的完全一致,表明克隆人Smac基因成功;pshut-tle-Egr1-hSmac分别用EcoRⅠ、SmaⅠ和BamHⅠ进行单酶切,片段大小分别为2621和5137;1437,2282和4039;3303和4455bp,酶切鉴定结果与预期结果完全一致,说明质粒pshuttle-Egr1-hSmac构建正确。结论成功地克隆了人Smac基因和构建了辐射诱导表达的腺病毒穿梭载体pshuttle-Egr1-hSmac。