金黄色葡萄球菌REP-PCR指纹图谱分型方法优化

？目的优化金黄色葡萄球菌细菌基因组重复序列PCR(REP-PCR)指纹图谱分型方法,并在临床分离株分型研究中应用,为构建金黄色葡萄球菌同源性追踪体系提供依据。方法试剂盒法提取金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC25923基因组DNA作为模板,根据参考文献设计REP引物,PCR扩增其基因组中靶序列。优化反应体系Mg2+浓度、模板量、引物浓度和退火温度,以得到最佳指纹图谱。以优化好的REP-PCR方法对10株金黄色葡萄球菌临床分离株进行分型。结果PCR反应体系Mg2+浓度2.5mmol/L,DNA模板量125ng/25μL,引物REP1R、REP2浓度各0.6μmol/L,退火温度40℃时,指纹图谱条带最清晰、明亮;10株临床分离株指纹图谱均在0.5~1.0kb之间出现1条相同条带,其中1~3,4,5,8,9号菌株图谱相同;7和10号菌株除在0.5~1.0kb出现1条条带外,还在1.0~1.5kb出现1条条带,在1.5~2.0kb出现1条条带;6号菌株共产生5条条带,分别出现在0.5~1.0kb(2条),1.0~1.5kb(2条)和1.5~2.0kb(1条)。结论成功建立优化的金黄色葡萄球菌REP-PCR指纹图谱分型方法;10株临床分离株用该法分为3型。