引物末端不同碱基对聚合酶链反应产物影响

？目的探索引物末端3'端不同碱基对聚合酶链反应产物的影响。方法以含有乙肝病毒(HBV)完整基因组的重组质粒pUC-19为模板,利用3'端碱基分别为A,T,C,G的下游引物,在相同的上游引物和退火温度下进行聚合酶链反应。结果不同的反应体系在相同退火温度下目的产物和引物二聚体形成不同;A表示上游引物,P表示下游引物;下游引物共计4条,分别用P1、P2、P3、P4表示,其3'端碱基分别为T,G,A,C。上下游引物共4对,分别用AP1、AP2、AP3、AP4表示;退火温度为50℃时,AP1和AP4有明显的扩增产物,AP3扩增产物稍少,AP2产物肉眼观察不到,有非特异性产物生成;退火温度升至55℃时,AP1和AP2有明显的扩增产物,AP4少量扩增产物,P3产物肉眼观察不到,AP1和AP4反应体系引物二聚体生成情况基本相同,AP2和AP3引物二聚体生成较少;退火温度升至62℃时,AP1和AP2有明显的扩增产物,AP4扩增产物稍少,AP3产物肉眼观察不到,可观察到引物二聚体生成稍多。结论3'端不同碱基对聚合酶链反应产物有很大影响。