ERCC1密码子118单核苷酸多态性转染细胞模型建立

？目的建立切除修复交叉互补集团1(ERCC1)基因单核苷酸多态性(SNP)转染细胞模型,为体外研究基因多态性功能提供平台。方法Gateway定向克隆技术构建ERCC1表达载体,包含不同ERCC1codon118SNP表达载体转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)缺陷型UV20细胞,蛋白免疫印迹法(westernblot)检测ERCC1蛋白表达,焦磷酸短序列测序PSQ检测ERCC1118SNP基因型。结果酶切鉴定及测序分析表明ERCC1表达载体构建正确,各转染细胞表达绿色荧光蛋白并可在G418培养基选择生长;ERCC1在UV20细胞中表达分子量为38kDa蛋白,ERCC1SNP基因型正确,2种转染细胞ERCC1的SNP基因型不同,分别为C/C或T/T。结论ERCC1codon118SNP细胞转染模型构建成功,为体外研究ERCC1codon118SNP不同基因型提供了实验技术平台。