幽门螺杆菌尿素酶B在乳酸乳球菌中表达与优化

？目的探讨幽门螺杆菌尿素酶B(UreB)在食品级乳酸乳球菌NZ3900菌株中的优化表达条件。方法利用基因重组技术构建乳酸乳球菌NZ3900(pNZ8110/ureB);采用L25(56)正交表设计,选定诱导剂浓度、诱导时机、诱导时间3个因素各5个水平;采用乳酸链球菌素诱导表达后,检测不同组合的UreB在乳酸乳球菌中的表达,凝胶扫描后用Genetools分析软件进行目的蛋白占细菌总蛋白比例分析;应用极差分析法比较影响蛋白表达的因素主次关系及目的蛋白优化表达条件;应用正交试验方差分析法进行方差分析。结果乳酸乳球菌重组子NZ3900(pNZ8110/ureB)表达的可溶性UreB蛋白最高可达27.26μg/mL,占上清总蛋白比例最高可达20.19%;3个因素对UreB蛋白表达量的影响大小依次为诱导时间、诱导时机和诱导剂浓度,方差分析结果显示,诱导时间对UreB蛋白表达的影响具有统计学意义(P<0.05)。结论应用正交试验法获得UreB蛋白在乳酸乳球菌中的优化表达条件,为进一步评价免疫预防抗幽门螺杆菌感染的效果奠定基础。