微小隐孢子虫腺苷酸激酶基因克隆及分析

？目的获得微小隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum,Cp)南京(NJ)株的腺苷酸激酶(adenylatekinase,AK)基因的核苷酸和氨基酸序列,比对分析与其他隐孢子虫株AK基因序列的差异。方法采用昆明种小鼠建立微小隐孢子虫NJ株感染模型,根据GenBank微小隐孢子虫IowaII株AK基因已知序列设计合成2对引物,应用巢式PCR方法从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增AK基因,并将其克隆入pMD18-T载体;对重组质粒pMD18-T-CpAK经PCR及酶切鉴定后测序,应用生物信息学方法分析微小隐孢子虫NJ株AK基因与其他虫株的核苷酸和氨基酸序列差异。结果巢式PCR扩增获得特异的AK基因序列,酶切及PCR鉴定为正确的pMD18-T-CpAK重组质粒,扩增序列为903bp,含隐孢子虫AK全长基因663bp;核苷酸序列测定及同源性分析表明,微小隐孢子虫NJ株AK基因与人隐孢子虫TU502type2株AK的同源性为99%,与微小隐孢子虫IowaII株AK序列同源性为98%;进化树分析表明,微小隐孢子虫NJ株的AK基因与人隐孢子虫TU502type2株AK基因亲缘关系最近。结论成功克隆到微小隐孢子虫NJ株AK基因并获得GenBank基因登录号(HM067440),该AK基因在不同物种间高度保守。