EndoG基因过表达对镉诱导HEK-293细胞凋亡影响

？目的观察细胞凋亡因子核酸内切酶G(endonucleaseG,EndoG)基因过表达在镉诱导人胚胎肾细胞HEK-293凋亡中的影响。方法从人肝癌细胞系(humanhepatocarcinomacells,HepG2)中提取RNA,经逆转录获取互补DNAcDNA),通过聚合酶链反应(PCR)扩增EndoG基因,与pcDNA3.0相连,构建pcDNA3.0-EndoG真核表达载体,转染HEK-293细胞,并结合不同浓度氯化镉处理细胞;通过蛋白印迹实验(Westernblot)验证基因过表达,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染法及流式细胞术(FCM)检测EndoG基因过表达对镉诱导HEK-293细胞凋亡的影响,噻唑蓝法(MTT)检测细胞存活率。结果成功构建pcDNA3.0-EndoG真核表达载体,EndoG基因扩增片段大小约1100bp;该载体转染细胞后,EndoG成功过表达,使HEK-293细胞凋亡率>37%,且随氯化镉浓度增加,EndoG表达量先上升后下降。结论EndoG以诱导细胞早期凋亡和晚期凋亡为主要形式。