金黄色葡萄球菌新型肠毒素基因构建与表达

？目的从金黄色葡萄球菌SD和104菌株中克隆肠毒素基因,以期获得新型肠毒素。方法采用已知的金葡菌肠毒素基因保守序列设计引物,以SD和104菌株基因组为模板,PCR扩增产物插入表达载体pET28a并转化大肠埃希菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍离子金属螯合(Ni+-NTA)亲和层析纯化重组蛋白,测定重组蛋白超抗原活性及体外抑瘤效果。结果成功扩增到2个新型肠毒素P基因;带有质粒pET28a-SEPSD和pET28a-SEP104的重组大肠埃希菌,在1mmol/LIPTG诱导下高效表达,重组蛋白纯度>95%;纯化蛋白刺激人淋巴细胞增殖率分别>30%;抑瘤率明显高于金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2),200ng/mL时抑瘤效果最佳,分别达到82%和86%。结论成功克隆到金葡菌新型肠毒素P基因,SEPSD和SEP104重组蛋白具有与SEC2相近的活性并有较高的抑瘤效果。