HBV阳性血清体外感染HepG-2细胞方法建立

？目的建立乙型肝炎病毒(HBV)阳性血清体外感染人肝癌细胞系HepG-2的方法。方法低温同步化处理HepG-2细胞后用高浓度HBV阳性血清与含有4%聚乙二醇的无血清伊格尔极限必需培养基(MEM)共孵育HepG-2细胞,设阴性对照组和空白对照组;18h后加入含10%胎牛血清的MEM继续培养6d,每隔24h收集细胞和培养上清,荧光定量PCR检测HBVDNA,间接免疫荧光技术检测细胞内乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)。结果HBV阳性血清感染组HepG-2细胞内和培养上清中在感染后第1d可检测到HBVDNA,分别为(16.04±7.99)×103、(8.84±3.97)×103copies/mL,细胞内DNA含量在第2d达到(3.51±1.86)×105copies/mL,然后逐渐下降,在第4d降到检测下限以下,而培养上清中病毒DNA在检测的时间内逐渐升高,在第6天达到(8.41±5.34)×105cop-ies/mL;间接免疫荧光检测感染组细胞膜和胞浆中均有HBsAg表达;传代培养感染细胞后,在第1代细胞培养上清和细胞内均可检测到HBVDNA(3.58×105、7.34×105copies/mL),第2代培养上清中可检测到少量HBVDNA(2.89×103copies/mL),但细胞内检测到HBVDNA低于检测下限(896copies/mL),第3代细胞的上清和细胞内均未检测到HBVDNA。结论HBV阳性血清在一定条件下可以感染HepG-2细胞,病毒能在细胞内进行短期复制。