大肠埃希菌外膜蛋白T水解人防御素-4作用

？目的探讨外膜蛋白T(OmpT)在大肠埃希菌CFT073致尿路感染中的作用机制。方法以人膀胱癌上皮细胞5637的cDNA为模版,扩增人防御素-4(HBD-4)基因,连接至质粒pET-28a,重组质粒经转化、诱导和纯化处理后获得His-HBD-4融合蛋白;采用琼脂糖扩散法和最小抑菌浓度方法检测HBD-4对ompT野生株、敲除株和回补株的抗菌活性,并分别观察比较ompT野生株CFT073、敲除株和回补株水解HBD-4的差异。结果通过测序鉴定及双酶切电泳证实成功构建HBD-4原核表达载体pET-28a-HBD-4,获得HBD-4体外表达菌株;HBD-4对CFT073与ompT敲除株的最小抑菌浓度不同,野生株为10μg/mL,敲除株为6μg/mL;与HBD-4共同孵育后,敲除株的生长状态受到抑制,但对野生株的影响较小。结论初步证实ompT作为毒力因子参与对人固有免疫系统成分的水解,在大肠杆菌致尿路感染的过程中发挥重要作用。