弓形虫肌动蛋白表达及其抗血清制备

？目的体外制备弓形虫肌动蛋白(actin)及其多克隆抗体。方法以弓形虫cDNA链为模板,PCR扩增actin基因,亚克隆至pET30a载体,转化到大肠埃希菌BL21中;异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达actin-His6蛋白;用纯化的蛋白加免疫佐剂免疫SD大鼠,收集抗血清,制备多克隆抗体,抗体亲和纯化柱纯化并分析抗体的效价。结果actin基因的PCR扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳,结果显示,在1000bp附近有一条带,与目的基因(actincDNA长度为1131bp)大小相符;actin/pET30a重组质粒经BamHI和XhoI双酶切,1.0%琼脂糖凝胶电泳分析酶切产物,在1000和5000bp附近可见条带;actin-His6蛋白在3~4h时表达量达到峰值;蛋白可溶性分析显示,actin-His6蛋白主要以包涵体的形式存在;获得了抗actin-His6蛋白的大鼠源性抗血清。结论弓形虫actin蛋白在原核系统中得到了表达,用该蛋白免疫动物后获得了抗血清。