微小隐孢子虫20K亲环蛋白基因克隆及分析

？目的克隆微小隐孢子虫(Cp)南京株(NJ)的20K亲环蛋白(CyP)基因,并对其核苷酸和氨基酸序列进行分析。方法采用昆明种小鼠建立微小隐孢子虫NJ株感染模型,根据微小隐孢子虫IowaII株20KCyP基因序列设计合成2对引物,应用巢式PCR技术从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增20KCyP基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,将阳性克隆重组质粒进行菌落PCR及双酶切鉴定;应用生物信息学方法分析微小隐孢子虫NJ株20KCyP基因与其他虫株核苷酸和氨基酸序列差异,并分析该基因蛋白结构域。结果巢式PCR扩增得到特异的20KCyP基因,经PCR及双酶切鉴定获得了正确的pMD18-T-20KCyP重组质粒;测序结果显示,微小隐孢子虫NJ株20KCyP基因全长519bp,编码173个氨基酸,该基因已登录GenBank,登录号为JQ284431;氨基酸序列分析表明,微小隐孢子虫NJ株与IowaII株20KCyP基因编码的氨基酸序列具有100%同源性;对20KCyp基因进行蛋白结构域分析,显示该基因序列所编码的蛋白具有特异性类亲环蛋白A、B、H的肽脯氨酰顺反异构酶(PPIase)区域,该区域与人的亲环蛋白A、B、H具有相似性。结论成功克隆微小隐孢子虫NJ株20KCyP基因,该基因具有高度保守性。