家蝇溶菌酶MDLZM基因克隆、表达和序列分析

？目的探讨家蝇溶菌酶(MDLZM)基因及编码的蛋白质结构和特征。方法利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具,结合其他生物信息学分析软件包,从GenBank上家蝇基因组序列识别出编码MDLZM的基因,分析预测该蛋白质的结构功能;设计引物PCR扩增MDLZM基因,将其克隆到原核表达质粒PEASY-E1中,重组质粒在大肠杆菌中的表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。结果MDLZM基因序列最大开放阅读框(ORF)为435bp,编码145个氨基酸,理论分子量为15958.4Da,等电点为8.65;构建的重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定确为MDLZM基因;SDS-PAGE分析结果显示,重组质粒可在大肠杆菌OrigmiB/DE3中表达,表达产物纯化后得到的融合蛋白相对分子质量约为15958.4Da,诱导18h蛋白表达量最高,SDS-PAGE鉴定得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符。结论成功构建PEASY-E1-MDLZM重组原核表达质粒并表达出融合MDLZM蛋白。