食品中腰果过敏原成分PCR检测方法建立

？目的建立食品中腰果过敏原成分的PCR检测方法。方法采用溴化十六烷三甲基胺(CTAB)法和磁珠法提取的坚果DNA,根据GenBank中腰果3种主要致敏蛋白AnaO1、AnaO2、AnaO3的基因序列,设计9对引物;通过扩增效果和特异性,筛选腰果最佳扩增引物对;采用腰果特异性引物对AnaO3F3R3和植物通用引物对Plant159,对腰果、杏仁、开心果等13种坚果成分进行双重PCR扩增,确定方法特异性;通过腰果DNA梯度稀释确定该检测方法灵敏度;通过样品添加试验模拟食品中腰果过敏原成分的检测。结果采用CTAB法提取坚果DNA的A260/A280比值普遍<1.8,说明存在蛋白质污染,采用磁珠法提取DNA的比值>1.8,说明去除蛋白质较干净;9对引物中,引物对AnaO3F3R3特异性最好,其最佳退火温度为55.4℃;采用该引物与植物通用引物对Plant159,对腰果、杏仁、开心果等13种坚果DNA进行双重PCR,只有腰果样品能扩增出312bp的特异性条带;采用该PCR法检测腰果过敏原成分的灵敏度为0.1pg/μL;可以检出食品中>0.001%的腰果成分。结论建立了一种食品中腰果过敏原成分的双重PCR检测方法,该方法特异性好,灵敏度高,与其他12种坚果不存在交叉反应。