靶向GCSsiRNA表达载体与胃癌细胞耐药性

？目的构建葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)小干扰RNA(SiRNA)表达载体,观察其对胃癌耐药细胞(SGC7901/VCR)GCS基因表达和耐药性的影响。方法根据siRNA的设计原则,针对人GCS的mRNA序列设计并合成编码siRNA的寡核苷酸序列,并将其克隆入SiRNA的表达载体,构建重组质粒,将重组质粒转染胃癌长春新碱(VCR)耐药细胞SGC7901/VCR,通过蛋白印迹实验(WB)等方法检测转染细胞GCS的表达水平,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞耐药情况。结果构建的GCSsiRNA表达载体经限制性酶切分析,证实释放出的片段大小与预期结果一致;转染SGC7901/VCR细胞后,可使细胞中GCS的表达受抑制,并使细胞对VCR的敏感性增加。结论GCSsiRNA表达载体的成功构建及其对GCS表达的抑制和细胞耐药的逆转,使其可能成为肿瘤基因治疗的一种新手段。