半巢式聚合酶链反应一次加样法检测血液HBVDNA

？目的消除巢式聚合酶链反应(nestedPCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)实验中2次加样带来交叉污染的机会,提高PCR特异性和敏感性.方法通过设计内部、外部引物的不同长度和不同反应浓度,改变退火温度,建立半巢式PCR一次加样法检测HBVDNA.3个PCR引物同时加入反应管进行2次PCR反应,在一个反应管内完成巢式PCR.结果该法可检出4个分子的目的基因片段.在16例ELISA和常规PCR检测HBV阴性的血清标本中,半巢式PCR一次加样法检出2例阳性.结论该方法简便、敏感、特异.与ELISA同时应用,可提高临床标本HBV阳性检出率,减少假阴性,这对减少输血等引起的HBV传播具有积极意义