缺失耶尔森菌HPIirp6基因EAggEC的构建

？目的构建小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6重组自杀质粒,并应用其构建EAggEC上该基因的缺失株.方法根据已知小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6基因序列,设计PCR引物,扩增并克隆了irp6结构基因,在体外进行精确突变后,插入氯霉素抗性基因.再将含氯霉素的irp6缺失基因亚克隆入自杀质粒pKNG101中,构建成irp6基因重组自杀质粒pKH6,并以肠粘附聚集性大肠杆菌EAggEC17-2为出发菌株,通过体内同源重组,置换其irp6基因.结果经接合转移和同源重组,利用蔗糖抗性筛选,pKH6上的同源序列有效的置换了EAggEC17-2的irp6基因.结论以小肠结肠炎耶尔森菌为靶构建的irp6基因重组自杀质粒成功的缺失了EAggEC17-2的irp6基因,获得了携带耶尔森菌强毒力岛的EAggEC17-2irp6基因缺失株EAG6,为进一步研究其功能打下了基础