超氧化物歧化酶基因突变在大肠埃希菌中表达

？目的在克隆人源铜锌超氧化物歧化酶基因(hCu,Zn-SOD)的基础上,对hCu,Zn-SOD进行定点突变,使其在E.coliDH5α中表达,为进一步改造hCu,Zn-SOD基因奠定基础。方法首先构建质粒pESOD,然后用定点突变技术把其中hCu,Zn-SOD的Cys111密码子突变为Ala111密码子,再与pUCMT1相连接,构建表达载体pESODT111,使其在E.coliDH5α中表达,表达产物用改良的邻苯三酚法和Westem杂交测定。结果hCu,Zn-SOD突变后在E.coliDH5α中成功表达,表达产物具有SOD活性,活力为16.447U/ml培养液。结论hCu,Zn-SOD基因经过定点突变后构建的表达载体可在DH5n中表达,表达产物同样具有天然的hCu,Zn-SOD活性。