多重RT-PCR同步检测A组轮状病毒P基因型

？目的建立A组轮状病毒VP4基因型的多重PCR分型方法,并用此方法对武汉地区婴幼儿腹泻样本进行检测。方法在分析A组轮状病毒VP4基因的基础上,选取引物con2、con3进行第一轮RT-PCR,然后以A组轮状病毒5个P基因型P[6]、P[8]、P[9]、P[4]和P[10]的特异性引物,进行第二轮巢式PCR,建立多重巢式RT-PCR同步检测A组轮状病毒P基因型技术。结果利用该方法可以同时检出5种不同基因型标准株混合物中的各个型别。将纯化的A组轮状病毒标准株RNA系列稀释后,用本方法进行检测,其灵敏度为0.1ng/μl。同时还对40份从武汉市儿童医院采集的A组轮状病毒阳性的腹泻儿童大便样本进行检测,其中P[8]有29例、P[4]有5例,另外发现有P[8]与P[4]混合感染4例。说明该方法对实际样本中的混合感染也能很好地分型。结论应用多重巢式RT-PCR对A组轮状病毒基因型研究将为临床诊断和实验研究提供一种快速、灵敏和特异的检测手段。