狭边大叶藓(Rhodobryumontariense)ISSR-PCR反应体系的建立与优化

？研究目的是获得适用于狭边大叶藓(Rhodobryumontariense)遗传多样性研究的ISSR-PCR反应标准化程序。通过单因素试验设计,对Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、模板、引物浓度,以及退火温度、循环次数等影响ISSR扩增的主要因素进行了研究和优化。结果表明,UBC808、UBC811、UBC812、UBC825、UBC826、UBC841、UBC888及UBC891引物适用于该研究;20μLISSR-PCR最适反应体系包括:6ngDNA模板、0.4μmol/L引物、2.25mmol/LMg2+、0.6UTaqDNA聚合酶、0.4mmol/LdNTPs。扩增程序为:94℃预变性4min;然后94℃变性1min,48~50℃(根据不同引物确定)复性2min,72℃延伸1min,共进行40个循环;最后,72℃延伸7min,4℃保存。