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ISSN: 2333-9721
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草业学报  2012 

正交设计优化山野豌豆SRAP-PCR反应体系与引物筛选

, PP. 325-330

Keywords: 山野豌豆,SRAP,PCR体系优化,正交设计,引物筛选

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Abstract:

采用正交试验设计,以山野豌豆叶片DNA为模板,从Mg2+、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶4种因素3个水平,对山野豌豆SRAP-PCR反应体系进行优化,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了山野豌豆的SRAP-PCR最佳反应体系。结果表明,山野豌豆SRAP-PCR最佳反应体系为:2μL10×PCRbuffer(不含Mg2+)、30ng的模板DNA、引物2.0μmol/L、Mg2+2.0mmol/L、TaqDNA聚合酶1.5U、dNTP0.2mmol/L,总体积为25μL。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以引物浓度影响最大,dNTP浓度的影响最小。运用该体系对3份山野豌豆种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从98对SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的20对引物组合。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为SRAP分子标记技术进行山野豌豆分子遗传学研究奠定了基础。

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