膜片钳技术在成年大鼠海马脑片应用的初步研究

目的：制备成年大鼠海马脑片，使其适应于膜片钳全细胞记录，并观察海马锥体神经元的电生理特性。方法：选200g左右的成年SD大鼠，雌雄不拘，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，四肢固定，剪开胸腔，夹闭下腔静脉，以0℃切片液进行心脏灌注，断头，取下全脑，置入0℃切片液中冰镇3min，再修块，切片，厚度约350μm，移入37℃预热的人工脑脊液中孵育1h后，转入23℃水浴中孵育30min备用。倒置相差显微镜和红外微分干涉相差显微镜观察脑片的神经元形态；全细胞膜片钳记录脑片神经元的电生理学特性。结果：海马CA1区神经元光泽度好，立体感强且突起明显；在进行膜片钳全细胞记录时，封接顺利，并且可以记录到电流和动作电位的变化图形。结论：本方法制备的成年大鼠脑片，可以耐受离体后缺血缺氧造成的损伤，保持电生理活性而适应膜片钳全细胞记录模式。