血管紧张素Ⅱ联合生长因子诱导人骨髓间充质干细胞分化为多巴胺能神经元

目的：观察血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）联合应用多种生长因子体外诱导人骨髓间充质干细胞（Humanbonemarrowmesenchymalstemcells，hBMSCs）向神经元和多巴胺神经元分化的潜能。方法：从正常人骨髓中分离单个核细胞并对hBMSCs进行纯化、鉴定；hBMSCs先经用碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子预诱导，再用胶质细胞源性神经营养因子（Glialcellline-derivedneurotrophicfactor，GDNF）和AngⅡ联合诱导生长良好的hBMSCs向神经元分化。倒置显微镜观察hBMSCs分化过程中细胞形态的变化；RT-PCR方法检测诱导前后hBMSCs神经干细胞的标记物巢蛋白（Nestin）、神经元特异性烯醇化酶（Neuron-specificenolase，NSE）、神经胶质细胞的特异性标记物酸性纤维蛋白（Glialfibrillaryacidicprotein，GFAP）以及多巴胺能神经元特异性标记物酪氨酸羟化酶（Tyrosinehydroxylase，TH）等标志物的表达情况；免疫荧光法检测诱导前后hBMSCs的NSE、TH和GFAP蛋白表达情况。结果：流式分析获得了高纯度的hBMSCs。在不同浓度的AngⅡ诱导2周后，倒置显微镜观察hBMSCs，具有典型神经元细胞形态，大多呈双极、多极和锥形；Nestin、NSE、TH的基因mRNA表达量，诱导组相较于对照组，有显著性差异（P<0.05）；免疫荧光细胞化学检测结果表明诱导分化后表达NSE、Nestin、TH蛋白的细胞数明显增加（P<0.05），但诱导前后的细胞都不表达GFAP基因。结论：多种生长因子联合AngⅡ可以在体外诱导hBMSCs分化为多巴胺能神经元样细胞。