重组葡激酶的表达纯化及纤溶活性鉴定

目的：构建葡激酶（Staphylokinase，SAK）基因的原核表达质粒，在大肠杆菌中表达SAK蛋白质，纯化并初步鉴定其生物学活性。方法：基于生物信息学方法分析优化基因序列，使用基因合成技术合成SAK基因，转化感受态大肠杆菌B834菌株，使在其中表达，利用离子交换柱，分子筛（Superdex75）等进行分离纯化，应用纤维蛋白平板溶圈法测定评价其生物活性。结果：SAK在大肠杆菌中以可溶上清的方式高效表达，利用离子交换柱和分子筛等纯化效果良好，纯度达95%，体外实验显示其纤溶活性与尿激酶标准品相当。结论：应用全基因合成经过优化的基因可在大肠杆菌系统中高效上清表达具有较高纤溶活性的SAK。