人源甲状腺髓样癌噬菌体抗体库的构建及初步鉴定

目的：应用噬菌体抗体展示技术，构建大容量天然人源甲状腺髓样癌（medullarythyroidcarcinoma，MTC）噬菌体单链抗体库。方法：提取ＭＴＣ病人癌周淋巴结总RNA，通过RT-PCR方法获得抗体可变区基因VH和VL基因片断，以它们为模板分别扩增VH-Linker和VL-Linker，再用剪切重叠延伸ＰＣＲ技术将之拼接组装成单链抗体可变区基因片段（singlechainfragmentvariable，scFv）后引入酶切位点SfiⅠ和NotⅠ。将scFv基因克隆入噬菌粒栽体pCANTAB-5E后经电转入大肠杆菌EcoliTG1，之后经辅助噬菌体M13K07超感染，构建人源MTC噬菌体单链抗体库。PCR鉴定scFv片段阳性插入率，1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆双酶切产物。结果：MTC周围淋巴结总RNA的琼脂糖电泳结果可见清晰的28S、18S条带；VH基因的大小约为370bp，VL基因为350bp，组装后的scFv基因约为750bp。用pUC19标准质粒测定转化效率达到108cfu/μg，scFv的阳性插入率为87.5％（21/24）。结论：成功地构建了人源MTC噬菌体展示文库，为进一步筛选具有MTC细胞特异性的人源噬菌体单链抗体奠定了实验基础。