干扰Krüppel样因子8表达对肝癌SMMC7721细胞中血管生成相关因子的调控作用

目的：构建Krüppel样因子8（Krüppel-likefactor8，KLF8）的真核表达质粒及干扰质粒，考查KLF8对人肝癌SMMC7721细胞中血管生成相关因子的调控作用。方法：构建KLF8的真核表达质粒pcDNA3.1-KLF8，测序确认。构建靶向不同KLF8干扰位点的干扰质粒pGPU6/GFP/Neo-KLF8，筛选出干扰效率最高的pGPU6/GFP/Neo-KLF8。将pcDNA3.1-KLF8、相应的对照质粒pcDNA3.1，pGPU6/GFP/Neo-KLF8、相应的对照质粒pGPU6/GFP/Neo-ShNC分别转染人肝癌SMMC7721细胞，共４组。实时荧光定量PCR及Westernblot检测KLF8的表达，qPCR检测各组细胞中低氧诱导因子（hypoxia-induciblefactor，HIF）1-α、血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）、血管生成素（angiopoietin，Ang）1、Ang2、血管生成素受体Tie2及基质金属蛋白酶（matrixmetallo-proteinase，MMP）2的mRNA表达。结果：pcDNA3.1-KLF8显著上调KLF8表达（相对表达量为68.8±6.5），pGPU6/GFP/Neo-KLF8下调KLF8的表达（相对表达量0.31±0.01）。转染pcDNA3.1-KLF8组与其对照组相比，VEGF、Ang2、HIF1-α及MMP2mRNA表达增加（P<0.05），血管生成素受体Tie2、Ang1的mRNA表达无差异（P＞0.05）；转染pGPU6/GFP/Neo-KLF8组与其对照组相比，Ang2和HIF1-α表达降低（P<0.05），VEGF、血管生成素受体Tie2、Ang1及MMP2的表达无差异（P＞0.05）。结论：在肝癌中，KLF8可能通过调控VEGF、Ang2、HIF1-α及MMP2来调控血管生成。