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重庆医科大学学报 2013
SIRT1基因shRNA慢病毒载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖的影响Keywords: 慢病毒,沉默信息调节因子1(SIRT1),乳腺癌细胞,RNA干扰 Abstract: 目的:探讨慢病毒介导沉默信息调节因子1(silentinformationregulator1,SIRT1)基因的shRNA对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响。方法:设计、合成2对针对SIRT1基因shRNA的寡核苷酸序列,与pLentilox3.7-GFP载体连接产生重组慢病毒质粒pshSIRT1-1、pshSIRT1-2,同时构建不针对任何基因的shRNA阴性对照pshCont。将表达shRNA的载体plentilox3.7与pLP1、pLP2和pLP/VSVG3种质粒共转染293FT细胞,包装产生慢病毒并测定病毒滴度。将慢病毒感染人乳腺癌细胞MCF-7,行realtime-PCR和Westernblot验证SIRT1基因的沉默效果,台盼蓝排斥实验和流式细胞仪分别检测其对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。结果:成功构建靶向SIRT1基因shRNA慢病毒载体并获得了相应的慢病毒。2个靶向SIRT1的shRNA均能有效抑制SIRT1基因的表达(P=0.0002),并使MCF-7细胞增殖明显减慢,凋亡明显增加(P=0.0060)。结论:靶向SIRT1基因RNA干扰能显著抑制MCF-7细胞的生长并促进其凋亡。
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