人水甘油通道蛋白9重组质粒的构建及表达

目的：构建人水甘油通道蛋白9（aquaglyceroporin9，AQP9）重组质粒，并检测其融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达，为阐明AQP9在非酒精性脂肪肝病（nonalcoholicfattyliverdisease，NAFLD）中的作用奠定基础。方法：通过RT-PCR方法从人肝脏组织中获得AQP9基因，插入pEGFP-N1质粒，构建重组质粒pEGFP-N1-AQP9，转染COS-7细胞，通过荧光显微镜检测其转染情况，RT-PCR和Westernblot检测AQP9在真核细胞中的表达。结果：PCR及酶切鉴定显示插入人AQP9大小正确。测序鉴定显示，1个碱基发生突变，45位：A→G，为无义突变。通过RT-PCR和Westernblot检测到AQP9表达，说明AQP9基因在COS-7细胞中表达并与绿色荧光蛋白融合，且具有免疫原性。结论：成功构建了pEGFP-N1-AQP9重组质粒，并在COS-7细胞中表达，为进一步研究AQP9在NAFLD发生发展中的作用奠定基础。