反相高效液相色谱法同时测定肝癌相关酪氨酸、缬氨酸对映体

目的：建立柱前衍生反向高效液相色谱荧光检测法同时对肝癌相关L-酪氨酸（L-tyrosine，L-Tyr）、D-酪氨酸（D-tyro－sine，D-Tyr）、L-缬氨酸（L-valine，L-Val）、D-缬氨酸（D-valine，D-Val）进行拆分测定。比较正常人与原发性肝细胞癌（hepato－cellularcarcinoma，HCC）（以下简称原发性肝癌）患者血浆中酪氨酸与缬氨酸对映体含量的变化，考察它们与原发性肝癌的关系。方法：柱前衍生化试剂：邻苯二甲醛（O-phthaldialdehyde，OPA）和N-乙酰-L-半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine，NAC）；色谱柱：菲罗门GeminiC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：20.0mmol/L磷酸二氢钠（pH6.8）-乙腈为流动相的梯度洗脱；荧光检测波长设定：激发波长（λex）为350nm，发射波长（λem）为450nm；流速1ml/min；柱温30℃；进样量10μl。结果：４种物质的回收率在90.74%~106.80%之间，线性关系良好，检出限分别为6.79pg/ml（L-Tyr），7.81pg/ml（D-Tyr），1.86pg/ml（L-Val），1.95pg/ml（D-Val）。利用该方法，对20名健康志愿者和23名HCC患者的血浆进行测定，统计分析结果表明，L-Tyr明显升高（P=0.011），L-Val（P=0.019）、D-Val（P=0.006）显著性降低，D-Tyr（P=0.973）无明显变化。结论：该方法准确、灵敏、重复性好，适用于实验室研究与临床检测。