Chk1基因对人卵巢癌细胞HO8910增殖及细胞周期调控的影响及可能机制

目的：探讨siRNA沉默检测点激酶1（Chk1）基因对人卵巢癌细胞HO8910增殖和周期调控的影响及其作用机制。方法：设计并合成3条Chk1siRNA干扰片段，转染进入卵巢癌细胞HO8910，Westernblot检测转染前后HO8910细胞中Chk1蛋白的表达情况，筛选出有效片段。将Chk1siRNA有效片段转染进入HO8910细胞，采用MTT法和流式细胞仪分析Chk1siRNA对HO8910细胞增殖和周期的影响；Westernblot方法分别检测细胞周期相关基因CyclinA、CDK4、Cdc25A蛋白表达。结果：3个siRNA中，1条是有效siRNA。该有效Chk1siRNA片段转染后，HO8910细胞中Chk1蛋白水平下降约53.6%，明显低于未转染组和脂质体转染组（P=0.000）。转染48h后，Chk1siRNA转染组HO8910细胞增殖活性下降，抑制率为（52.1±5.1）%，明显高于脂质体转染组的（7.6±3.8）%（P=0.000）。流式细胞仪检测显示Chk1siRNA转染组HO8910细胞G2/M期比例为（5.03±2.62）%，明显低于未转染组（19.35±2.19）%和脂质体转染组（19.76±2.67）%（P=0.000）。Westernblot结果显示转染Chk1siRNA后，细胞内与细胞周期相关的CyclinA、CDK4、Cdc25A蛋白水平表达明显增强，与未转染组和脂质体组比较，差异有统计学意义（P=0.000）。结论：siRNA沉默Chk1基因后，可明显抑制卵巢癌细胞HO8910细胞的增殖，其抑制增殖作用与减弱G2/M期阻滞有关。