转染CX3CR1基因对小鼠骨髓间充质干细胞向Fractalkine趋化能力的影响

目的：研究在Transwell共培养体系中，转染CX3CR1基因对小鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs）向趋化因子Fractalkine（FKN）趋化能力的影响。方法：采用差速贴壁法分离纯化小鼠MSCs，体外培养、传代扩增，流式细胞术检测细胞表面抗原标志和细胞周期；将携带有趋化因子受体CX3CR1基因及绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）基因的慢病毒（LV-CX3CR1-EGFP）及空载体病毒（LV-CON-EGFP）转染小鼠MSCs细胞，RT-PCR法分别检测空白对照组、实验组、阴性对照组细胞中CX3CR1mRNA表达情况，Westernblot印记法检测CX3CR1蛋白的表达水平，并通过Transwell共培养体系观察不同转染组细胞向趋化因子FKN的迁移情况。结果：成功获得了细胞形态均一，生长状态良好的MSCs；细胞CD29、CD44、CD34有阳性表达；阴性对照组和空白对照组小鼠MSCs不表达CX3CR1基因；构建的慢病毒过表达载体pUbi-MSC-CX3CR1-EGFP能成功转染至小鼠MSCs中，并使转染后的MSCs表达CX3CR1mRNA及蛋白。在Transwell共培养体系中，转染CX3CR1基因的小鼠MSCs向趋化因子FKN趋化能力明显强于各对照组（P=0.000），其中阴性对照组浸润至下室的细胞数为：（13.80±2.17）个每高倍镜视野（n=5）。实验组浸润至下室的细胞数为：（35.80±3.34）个每高倍镜视野（n=5）。FKN抗体阻断组浸润至下室的细胞数为（14.80±1.92）个每高倍镜视野（n=5）。结论：转染CX3CR1基因能有效增加小鼠MSCs向趋化因子FKN趋化的能力。